染色体解析・FISH解析/有限会社クロモソームサイエンスラボ
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固定細胞FISHプロトコル

<試薬>
FISHプローブ
ホルムアミド
エタノール

<FISH>

  1. 細胞標本を70℃ホットプレート上で2時間ハードニング

  2. 細胞標本にプローブを10μlアプライしカバーグラスをかける

  3. 70℃ホットプレート上で5分間変性処理

  4. 37℃で必要時間ハイブリダイズ


<洗浄・検出(ダイレクト蛍光標識プローブの場合)>

  1. 2×SSC中5分浸漬しカバーグラスを静かにはずす

  2. 37℃の50%ホルムアミド/2×SSC中20分浸漬

  3. 1×SSCですすぎ、1×SSC中15分浸漬

  4. DAPI染色後マウント

  5. 蛍光観察


<洗浄・検出(ハプテン標識プローブの場合)>

  1. 2×SSC中5分浸漬しカバーグラスを静かにはずす

  2. 37℃の50%ホルムアミド/2×SSC中20分浸漬

  3. 1×SSCですすぎ、1×SSC中15分浸漬

  4. 1%BSA/4×SSC溶液で希釈した抗体を100μlアプライしパラフィルムでカバーする

  5. 37℃で1時間反応

  6. 0.1% Nonidet P-40 (0.05% Tween20)/4×SSCで10分×2回、4×SSCで10分×1回洗浄

  7. DAPI染色後マウント

  8. 蛍光観察

 

 

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